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1材料與方法（那艾-拍打式無(wú)菌均質(zhì)器-NAI-JZQ）
1.1試驗(yàn)材料
試驗(yàn)樣品為5種紙巾,每種紙巾分別準(zhǔn)確稱取10 g ,每種6份,裝入牛皮紙袋內(nèi)經(jīng)160℃干熱滅菌2 h后備用。
主要儀器有拍擊式均質(zhì)器,GRX - 9073A型熱空氣消毒箱,全自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器和高壓消毒器和潔凈工作臺(tái)。
試驗(yàn)菌株為大腸桿菌(ATCC 25922),培養(yǎng)基用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基,稀釋液為滅菌生理鹽水。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1菌懸液制備將大腸桿菌傳代培養(yǎng),取第3代營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物,用5 ml滅菌生理鹽水將菌苔洗下,充分混混后制備成試驗(yàn)濃度的菌懸液。
1.2.2檢樣制備用滅菌生理鹽水將實(shí)驗(yàn)菌液稀釋
至103 ~103 cfu/ ml不同含菌量的菌懸液,以常規(guī)活菌計(jì)數(shù)法測(cè)定含菌量。將各紙巾檢樣分為A、B組，每種每組3份,在每份檢樣中滴染不同濃度菌懸液l ml,在無(wú)菌室內(nèi)自然晾干,備用。
1.2.3檢測(cè)方法①生理鹽水稀釋法:將B組染菌檢樣剪碎后加入到200 ml滅菌生理鹽水中,充分混勻,制備成生理鹽水樣液。取樣液1 ml接種無(wú)菌平皿,倒人冷卻至45℃的熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15~20 ml混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置37℃培養(yǎng)48 h,觀察結(jié)果,計(jì)數(shù)平板菌落數(shù)并計(jì)算出細(xì)菌總數(shù)。均質(zhì)器處理法:將A組染菌檢樣剪碎后加入到200 ml 滅菌生理鹽水中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1 ~2 min,制備成生理鹽水樣液。按上述方法接種培養(yǎng)。③結(jié)果計(jì)算:要求每個(gè)平板上菌落數(shù)在30~300 cfu/平板之間,按以下公式計(jì)算結(jié)果:細(xì)菌總數(shù)=平板菌落數(shù)×稀釋度。
2結(jié)果
統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，在檢樣含菌量高于103cfu/ g情況下,采用均質(zhì)器處理法檢測(cè)出細(xì)菌數(shù)比生理鹽水稀釋法檢測(cè)更接近實(shí)際菌數(shù),兩種方法的檢測(cè)結(jié)果有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。隨著檢樣中含菌量的增加,生理鹽水稀釋法的檢測(cè)結(jié)果較實(shí)際含菌量明顯偏低(表1)。
